Mach1-T1超級感受態(tài)細胞，英文名Mach1-T1 Super Competent Cells ，是一種可以用于快速質粒高效轉化的質?？寺∮?，且能抵抗噬菌體感染的克隆用E. coli Mach1-T1即用型化學感受態(tài)細胞。使用pUC19質粒進行熱激活轉化，在嚴格按照使用說明進行操作時，轉化效率可以達到5.0±0.5×108cfu/μg DNA。
Mach1-T1菌株由野生型non-K-12 E. Coli W菌株改造而來，是目前生長速度較快的感受態(tài)細胞之一，質粒熱激轉化的Mach-T1涂于氨芐平板后，可在8小時后挑取克隆，保證了單日內完成內涂板、挑克隆的高效性。過夜生長的單克隆接種4小時后可進行質粒小量制備。
Mach1-T1菌株的基因型F- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rK- mK+) ΔrecA1398 endA1 tonA [1]，該菌株缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒DNA的產量和質量；重組酶缺陷型 (recA1398)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使Mach1-T1可用于藍、白斑篩選；tonA突變賦予Mach1-T1菌株對噬菌體T1和T5的抗性。
保存條件：
-80ºC保存，一年內有效。避免反復凍融，通常制備6個月后轉化效率隨保存時間延長而逐漸降低。
注意事項：
感受態(tài)細胞禁止反復凍融，并應盡可能避免凍融，反復凍融會導致轉化效率大幅下降。
感受態(tài)細胞融化后，須盡快加入待轉化樣品，不宜在無轉化產物的情況下放置時間超過10分鐘或以上時間，以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。
待轉化樣品的體積通常不宜超過感受態(tài)細胞體積的10%，樣品體積過大會導致轉化效率下降。
感受態(tài)細胞對于溫度變化非常敏感，需要避免出現(xiàn)不應有的使用說明之外的溫度變化。
感受態(tài)細胞對于機械力非常敏感。加入待轉化樣品時應輕柔操作，不能使用移液槍吹打混勻。
通常僅建議取部分樣品用于轉化，這樣萬一遇到轉化失敗的情況，還留有樣品可以再次進行轉化。
使用說明：
1.解凍感受態(tài)細胞。取感受態(tài)細胞放置冰浴或冰水浴中融化，通常需要5分鐘以上的時間。解凍后須盡量在10分鐘內使用，放置時間過長會影響轉化效率。
2.DNA樣品的轉化。取一管感受態(tài)細胞，加入DNA樣品，例如質粒、連接產物或重組產物等，輕輕彈擊管底約2-3次或輕輕晃動約2-3次以混勻，立即冰浴靜置30min。注意：所用DNA體積通常不宜超過感受態(tài)細胞體積的10%，混合時不得使用移液器進行吹打。如果用于質粒的轉化擴增，冰浴靜置約10分鐘，后續(xù)可以直接涂板并培養(yǎng)過夜；如果用于連接產物或重組產物的轉化，建議冰浴靜置30min并嚴格執(zhí)行后續(xù)的熱激處理和復蘇培養(yǎng)等步驟，以提高轉化效率。
3.熱激處理。將冰浴放置的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激45秒。隨后立即轉移至冰水浴中靜置2分鐘以快速冷卻至接近零度。熱激及轉移至冰浴過程中切勿晃動離心管。
4.復蘇培養(yǎng)。加入900μl不含抗生素的LB培養(yǎng)基，顛倒數(shù)次混勻，37℃搖床約150rpm復蘇培養(yǎng)1小時。如果用于質粒的轉化擴增，復蘇培養(yǎng)10-20分鐘也完全足夠了；如果用于連接產物或重組產物的轉化，建議嚴格進行復蘇培養(yǎng)操作。
5.收菌涂板。約5000g室溫離心1min，沉淀細菌，吸除約900-950μl上清，余下的約50-100μl上清。用移液器輕輕吹打并重懸菌體，隨后涂布到含相應抗生素的LB平板上。注意：如果用于質粒的轉化擴增，可以僅取少量進行涂板；如果用于連接產物或重組產物的轉化，建議取所有重懸的菌液涂板。
6.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
商品信息已成功復制，啟研竭誠為您服務
