成人亚洲欧美日韩精品_人妻系列av无码专区_中日韩十逼高清无码视频_新欧美成人一区高清在线观看_日韩久久无码一二三区_国产精品国产一级a√_777米奇色狠狠888俺也去_国产真实的在线醉酒视频

商品描述

商品屬性

TOP10超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞，英文名TOP10 Super Competent Cells，是一種可以用于高效質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒穩(wěn)定復(fù)制的E. coli TOP10即用型化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞。使用pUC19質(zhì)粒進(jìn)行熱激活轉(zhuǎn)化，在嚴(yán)格按照使用說(shuō)明進(jìn)行操作時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可以達(dá)到1.0±0.5×109cfu/μg DNA。

TOP10菌株來(lái)源于MC1061菌株，是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的菌株之一，廣泛用于基因克隆、藍(lán)白篩選、質(zhì)粒穩(wěn)定擴(kuò)增等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。其生長(zhǎng)速度較快(比DH5α快，但比Mach1-T1慢)，10小時(shí)可見(jiàn)克隆。

TOP10表達(dá)Methyl coenzyme M reductase (mcrA),當(dāng)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物為真核細(xì)胞來(lái)源的、甲基化的DNA分子時(shí)，可優(yōu)先考慮。

TOP10菌株的基因型為F- mcrA Δ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG。該基因型與DH10B高度類(lèi)似(DH10B為galE15型，而TOP10為galU型)。其中hsdR用于有效轉(zhuǎn)化通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得的未甲基化DNA；lacZΔM15的表達(dá)使TOP10感受態(tài)可用于藍(lán)、白斑篩選；recA1可減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；endA1的突變提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；StrR使得該細(xì)胞具有硫酸鏈霉素抗性。

保存條件：

-80ºC保存，一年內(nèi)有效。避免反復(fù)凍融，通常制備6個(gè)月后轉(zhuǎn)化效率隨保存時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低。

注意事項(xiàng)：

感受態(tài)細(xì)胞禁止反復(fù)凍融，并應(yīng)盡可能避免凍融，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率大幅下降。

感受態(tài)細(xì)胞融化后，須盡快加入待轉(zhuǎn)化樣品，不宜在無(wú)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的情況下放置時(shí)間超過(guò)10分鐘或以上時(shí)間，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

待轉(zhuǎn)化樣品的體積通常不宜超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的10%，樣品體積過(guò)大會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率下降。

感受態(tài)細(xì)胞對(duì)于溫度變化非常敏感，需要避免出現(xiàn)不應(yīng)有的使用說(shuō)明之外的溫度變化。

感受態(tài)細(xì)胞對(duì)于機(jī)械力非常敏感。加入待轉(zhuǎn)化樣品時(shí)應(yīng)輕柔操作，不能使用移液槍吹打混勻。

通常僅建議取部分樣品用于轉(zhuǎn)化，這樣萬(wàn)一遇到轉(zhuǎn)化失敗的情況，還留有樣品可以再次進(jìn)行轉(zhuǎn)化。

使用說(shuō)明：

1.解凍感受態(tài)細(xì)胞。取感受態(tài)細(xì)胞放置冰浴或冰水浴中融化，通常需要5分鐘以上的時(shí)間。解凍后須盡量在10分鐘內(nèi)使用，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。

2.DNA樣品的轉(zhuǎn)化。取一管感受態(tài)細(xì)胞，加入DNA樣品，例如質(zhì)粒、連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物等，輕輕彈擊管底約2-3次或輕輕晃動(dòng)約2-3次以混勻，立即冰浴靜置30min。注意：所用DNA體積通常不宜超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的10%，混合時(shí)不得使用移液器進(jìn)行吹打。如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增，冰浴靜置約10分鐘，后續(xù)可以直接涂板并培養(yǎng)過(guò)夜；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議冰浴靜置30min并嚴(yán)格執(zhí)行后續(xù)的熱激處理和復(fù)蘇培養(yǎng)等步驟，以提高轉(zhuǎn)化效率。

3.熱激處理。將冰浴放置的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激45秒。隨后立即轉(zhuǎn)移至冰水浴中靜置2分鐘以快速冷卻至接近零度。熱激及轉(zhuǎn)移至冰浴過(guò)程中切勿晃動(dòng)離心管。

4.復(fù)蘇培養(yǎng)。加入900μl不含抗生素的LB培養(yǎng)基，顛倒數(shù)次混勻，37℃搖床約150rpm復(fù)蘇培養(yǎng)1小時(shí)。如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增，復(fù)蘇培養(yǎng)10-20分鐘也完全足夠了；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議嚴(yán)格進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)操作。

5.收菌涂板。約5000g室溫離心1min，沉淀細(xì)菌，吸除約900-950μl上清，余下的約50-100μl上清。用移液器輕輕吹打并重懸菌體，隨后涂布到含相應(yīng)抗生素的LB平板上。注意：如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增，可以?xún)H取少量進(jìn)行涂板；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，建議取所有重懸的菌液涂板。

6.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。

本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。